Pharmazeutische Proteine – Leistungsangebot und Ausstattung

Klonierungsstrategien

• Design von Expresions-Plasmiden, artspezifische Codon-Optimierung

Proteinexpression in E. coli

• Batch- und Fed-batch-Fermentationen, Hochzelldichtefermentationen
• Isolierung von Einschlusskörpern und Rückfaltung von Proteinen
• Ertragsstarke lösliche Proteinreinigung

Aufreinigung von markierten Proteinen

• Einstufige Aufreinigungsmethode mit Tags
• Tag-Entfernung mit speziellen Enzymen

Weitere Aufreinigung von Proteinen

• Chromatographie: Ionenaustausch, Größenauschlusschromatographie, hydrophobe Austauschchromatographie, IMAC
• Farbstoffaffinitätschromatographie durch Immobilisierung von Proteinen und Peptiden
• Rückfaltung von Protein

Proteinexpression in Säugetier-Zelllinien

• Stabile Zelllinien-Produktion

Proteincharakterisierung

• Gelelektrophorese (SDS-PAGE, Native, IEF, 2-D) und Färbung mittels Coomassieblau oder Silbernitrat
• Bestimmung von Proteinkonzentration
• Westernblotting
• Messen des Absorptionsspektrums
• N-terminale Sequenzierung
• Peptide Mapping
• Massenspektrometrie
• Enzymaktivitätsmessungen

Für die Aufarbeitung nach der Fermentation (Downstream Processing) von (Pharma)-Proteinen stehen als Ausstattung zur Verfügung:

Isolierung der Biomasse

• Diskontinuierliche Zentrifugen, Durchlaufzentrifugen
• Mikrofiltration

Zellaufschluss

• Hochdruckhomogenisator
• Kugelmühlen
  
• Ultraschallaufschluss

Klärung der Extrakte (Überstände) und Konditionierung

• Ultrazentifuge
• Mikrofiltration
• Proteinfällung
• Wässrige Zweiphasensysteme

Proteinreinigung

• Mehrere Systeme zur flüssigkeitschromatographischen Reinigung von Proteinen (ÄKTApurifier, ÄKTAexplorer, Smart-system)

Charakterisierung

• SDS-PAGE, IEF, 2-D-Elektrophorese, Western Blot
  
• HPLC
• Edman-Sequenzierung
• Maldi-Tof-MS/MS
• LC-MS/MS